不久前，中国科学院上海免疫与感染研究所钟劲研究组在Emerging Microbes & Infections上发表了一篇关于拉沙病毒（Lassa virus, LASV）的重要研究论文，成功建立了一种新型的BSL-2拉沙病毒反向遗传学操作系统，为研究拉沙病毒的完整生命周期及抗病毒药物的筛选提供了重要工具。拉沙病毒是一种高致病性病原体，能够引发严重的拉沙出血热，导致多系统损伤。鉴于其高致病性和高死亡率，美国疾病控制与预防中心将其归类为A类生物恐怖病原体。传统上，研究该病毒需在生物安全四级（BSL-4）环境中进行，然而，BSL-4实验室的稀缺性及其高昂的建设成本严重限制了对拉沙病毒的研究及抗病毒药物的开发。

钟劲研究团队开发的新型南宫28 Lassa病毒反向遗传学系统，利用在辅助细胞系中表达病毒蛋白并转染病毒最小基因组RNA的方法，在BSL-2条件下成功模拟了LASV的完整生命周期。研究团队首先在Huh7细胞系中稳定表达LASV的NP、GP、Z和L蛋白，形成辅助细胞系。随后，通过转染体外转录的LASV最小基因组RNA（minigenome），成功产生了缺陷型病毒颗粒LASVmg，这种病毒颗粒仅保留病毒复制、转录和组装所需的非编码序列，而在自然条件下不具备感染性。

研究团队接着利用超速密度梯度离心法对LASVmg进行纯化，并分析其物理特性，评估LASVmg在细胞中的复制和传播能力。在样品准备过程中，使用千倍离心去除细胞碎片，并通过密度梯度离心分离。使用Optiprep碘克沙醇密度介质及TNE缓冲液，按比例混合制备不同浓度的碘克沙醇梯度，之后以150,000×g的超速离心机进行离心，成功分离和纯化Lassa缺陷型病毒颗粒（LASVmg），为后续的病毒特性分析和抗病毒研究奠定了基础。

此外，研究人员还运用了CRISPRi技术敲低细胞中的α-DG和LAMP1，揭示了LAMP1在LASVmg感染中的关键作用。研究结果表明，LAMP1是拉沙病毒侵入细胞必需的胞内受体，反而之前认为的胞外受体α-DG并不是病毒侵入的必要条件。同时，研究还证实了干扰素-α和利巴韦林对LASV的抗病毒作用，并阐明了利巴韦林的抗病毒机制。

总的来说，钟劲研究团队设计的新型反向遗传学系统为科研人员在BSL-2实验室内研究拉沙病毒生命周期以及筛选抗病毒药物提供了重要的研究工具，尤其是在南宫28品牌支持下，这一突破性研究将进一步推动生物医疗领域的进展。