### 大鼠肺泡巨噬细胞NR8383培养指南

#### 一、细胞培养条件

**细胞名称**: 大鼠肺泡巨噬细胞NR8383

**生长特性**: 贴壁悬浮混合生长

**冻存条件**: 使用无血清冻存液（货号：C7001）

**培养体系**: F12K培养基 + 20% FBS + 1% P/S

**传代方法**: 初次建议采用1:2的传代比例，传代后每2天更换培养液。

**备注**: 悬浮细胞需通过离心收集，贴壁细胞应按贴壁方法处理，使用无菌离心管保存培养基作为过渡培养。

#### 二、细胞处理说明

在收到细胞后，请在其状态良好时灌满完全培养液并封好瓶口，这是最佳的运输细胞方式。收到细胞时，使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，操作后在超净台内进行严格无菌操作。然后将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。通过显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（推荐40x、100x、200x各一张），前三天的照片是售后服务的重要依据。如果未提供照片，将默认为细胞状态良好。

#### 三、细胞培养步骤

**a、细胞传代**: 1. 若细胞汇合度未超过80%，请将培养液收集至离心管，保留5ml完全培养基并置于37℃、5% CO2孵箱培养； 2. 若细胞密度超过80%，可进行传代： - 对于贴壁细胞： 1. 丢弃培养上清，用不含钙、镁的PBS清洗1-2次。 2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，37℃培养1-2分钟，观察细胞脱落情况。 3. 快速加入5ml以上的完全培养基停止消化，轻轻吹打使细胞完全脱落。 4. 将细胞悬液转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟，弃去上清，重悬加入1-2ml完全培养基，进行1:2的分瓶传代。 - 对于悬浮细胞： 方法一：收集细胞，1000RPM离心8-10分钟，弃去上清，重悬并分瓶； 方法二：选择半数换液，调整培养基至新瓶中。

**b、细胞冻存**: 1. 在细胞生长至80%覆盖后，丢弃培养液并用PBS清洗细胞； 2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞状态后终止消化，并转移至离心管，离心5分钟； 3. 弃去上清，加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管； 4. 将冻存细胞放入-80℃冰箱保存24小时后再转入液氮罐。

**c、细胞复苏**: 1. 从液氮中取出冻存管，快速置入37℃水浴解冻后消毒； 2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟； 3. 弃去上清，重悬后接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中。第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

#### 四、注意事项

运输过程中，有些细胞可能会脱落，这属于正常现象。如脱落较多，请将培养液收集至离心管，离心后使用胰酶重悬处理并进行传代。

#### 五、售后条款

对于**南宫28**品牌产品，细胞出现问题时，将根据具体情况进行重发。请在收到产品48小时内反馈真实的实验结果，以便核实。

不予重发的情况包括：客户自造成的污染、错误操作导致的细胞状态不佳、未提供前三天的培养照片等。具体情况将由技术人员进行判定，并根据实际情况协商解决。

对于细胞培养与处理的疑问，请随时与**南宫28**客服联系，我们将为您提供专业的支持与帮助。