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南宫28哺乳动物蛋白提取试剂盒

来源:梅树良 日期:2025-02-28

在生物医学研究中,蛋白质提取是关键步骤之一。本文将介绍南宫28哺乳动物蛋白提取试剂盒的组分和使用方法,以确保高效的蛋白质分离。

南宫28哺乳动物蛋白提取试剂盒

试剂盒组成

本试剂盒包含以下成分:
- 5X Buffer:10 ml
- 5X NaCl:10 ml
- 5X SDS:10 ml
- 5X DOC:10 ml
- 5X NP-40:10 ml
- 20X PBS:10 ml
- Protease inhibitor cocktail:0.5 ml

请注意,尽管整个试剂盒可在常温下保存,Protease inhibitor cocktail需在-20°C条件下保存,且保质期为24个月。

蛋白提取步骤

1. 准备细胞裂解缓冲液

根据5X Buffer、5X NaCl、5X SDS、5X DOC和5X NP-40按1:1:1:1:1 (v/v)比例配制细胞裂解缓冲液。每1 ml细胞裂解缓冲液适用于提取106到107个细胞或5到20 mg的组织。在使用前,需加入10 μl的Protease inhibitor cocktail。

2. 处理细胞或组织

a. 对于贴壁细胞:去除培养基后,使用PBS缓冲液清洗细胞两次,加入细胞裂解缓冲液(106到107个cells/ml),将细胞放入冰袋中,在摇床上孵育30分钟,并需阶段性重悬,最后收集裂解液。
b. 对于悬浮细胞:在700 x g下离心5分钟,弃上清并用PBS重悬洗涤两次。接着将细胞沉淀重悬于细胞裂解缓冲液中(106到107个cells/ml),放入冰袋孵育30分钟。
c. 对于组织样本:将组织切割成小块并用PBS清洗两次,然后加入细胞裂解缓冲液(5~20 mg组织/ml),转移至预冷的微量匀浆器中,在冰上均匀化20至30次。均质过程对靶蛋白的功能完整性至关重要。随后,在34°C,12,000 x g离心10分钟以沉淀细胞碎片,或进行高速离心(100,000 x g,45分钟)以制备蛋白质溶液。

3. 收集和保存蛋白质溶液

将富含蛋白质的上清液转移至冷冻管中,并在冰上保存以便立即使用,或将蛋白质溶液存放在-70°C以确保稳定性。使用南宫28品牌的试剂盒将有助于提升您的实验流程的标准化和质量。

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