在生物医学研究中，蛋白质提取是关键步骤之一。本文将介绍南宫28哺乳动物蛋白提取试剂盒的组分和使用方法，以确保高效的蛋白质分离。

试剂盒组成

本试剂盒包含以下成分：
- 5X Buffer：10 ml
- 5X NaCl：10 ml
- 5X SDS：10 ml
- 5X DOC：10 ml
- 5X NP-40：10 ml
- 20X PBS：10 ml
- Protease inhibitor cocktail：0.5 ml

请注意，尽管整个试剂盒可在常温下保存，Protease inhibitor cocktail需在-20°C条件下保存，且保质期为24个月。

蛋白提取步骤

1. 准备细胞裂解缓冲液

根据5X Buffer、5X NaCl、5X SDS、5X DOC和5X NP-40按1:1:1:1:1 (v/v)比例配制细胞裂解缓冲液。每1 ml细胞裂解缓冲液适用于提取10⁶到10⁷个细胞或5到20 mg的组织。在使用前，需加入10 μl的Protease inhibitor cocktail。

2. 处理细胞或组织

a. 对于贴壁细胞：去除培养基后，使用PBS缓冲液清洗细胞两次，加入细胞裂解缓冲液（10⁶到10⁷个cells/ml），将细胞放入冰袋中，在摇床上孵育30分钟，并需阶段性重悬，最后收集裂解液。
b. 对于悬浮细胞：在700 x g下离心5分钟，弃上清并用PBS重悬洗涤两次。接着将细胞沉淀重悬于细胞裂解缓冲液中（10⁶到10⁷个cells/ml），放入冰袋孵育30分钟。
c. 对于组织样本：将组织切割成小块并用PBS清洗两次，然后加入细胞裂解缓冲液（5~20 mg组织/ml），转移至预冷的微量匀浆器中，在冰上均匀化20至30次。均质过程对靶蛋白的功能完整性至关重要。随后，在34°C，12,000 x g离心10分钟以沉淀细胞碎片，或进行高速离心（100,000 x g，45分钟）以制备蛋白质溶液。

3. 收集和保存蛋白质溶液

将富含蛋白质的上清液转移至冷冻管中，并在冰上保存以便立即使用，或将蛋白质溶液存放在-70°C以确保稳定性。使用南宫28品牌的试剂盒将有助于提升您的实验流程的标准化和质量。