南宫28提供的大鼠肺泡巨噬细胞NR8383培养说明书，旨在指导科研工作者合理有效地培养和管理细胞。本说明书涵盖了细胞的培养条件、处理方法和注意事项，以确保您在使用南宫28细胞时获得最佳的研究成果。

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡巨噬细胞NR8383
生长特性：贴壁悬浮混合生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：F12K+20%FBS+1%P/S
传代方法：初次建议1:2传代，2天换液。对于悬浮细胞，使用离心收集，贴壁细胞请按贴壁培养方法处理。

二、细胞收到后处理

收到南宫28细胞后，培养至良好状态，灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最佳选择。用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，并在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定其状态。显微镜观察细胞生长情况并记录不同倍数的照片（建议分别拍摄40x、100x、200x），前三天的照片为重要售后依据，如无照片则默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

1. 如果细胞未超过80%汇合度，需将完全培养液收集至离心管，保留5ml继续培养；如果细胞密度超过80%，可进行传代。
2. 对于贴壁细胞：
 1) 弃去上清，使用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
 2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液，置37℃培养箱1-2分钟，并观察细胞状态，待细胞变圆脱落后加入完全培养基终止消化。
 3) 吸出细胞悬液至15ml离心管，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，重悬于1-2ml完全培养基中。
 4) 按1:2比例分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5%CO2培养箱中培养。
3. 对于悬浮细胞：
 方法一：收集细胞，1000RPM离心8-10分钟，弃上清液，重悬并分瓶。
 方法二：可选择半数换液，将剩余细胞悬起分瓶。

b. 细胞冻存

1. 细胞覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，并用PBS清洗；
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞变化，终止消化后离心收集细胞；
3. 加入无血清冻存液并混匀，转移至冻存管中；
4. 将冻存细胞放入-80℃冰箱，转入液氮罐前需至少存放24小时。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，迅速放入37℃水浴中解冻；
2. 将细胞移至15ml离心管中，进行离心，弃上清，重悬后接种至T25培养瓶；
3. 放置于37℃、5%CO2培养箱中，第二天更换新鲜培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能因不牢固贴壁而脱落，这属于正常现象。如脱落较多，可通过离心处理，重悬并按正常传代操作步骤执行。

五、售后条款

1. 若细胞出现问题，需重发的情况包括细胞运输损坏、污染问题等，均需在收到后及时反馈并提供真实实验结果。
2. 不予重发的情况包括客户造成的污染、不当操作或培养条件不当等，视具体情况而定。

南宫28致力于为科研人员提供优质细胞资源和服务，确保您的研究高效顺利进行，如有进一步需求，欢迎随时与我们联系。