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NEWS南宫28 GPCR19激动剂操作规程
来源:彭风瑞 日期:2025-03-21在进行GPCR19激动剂(TGR5受体激动剂)的实验操作时,请遵循以下步骤:
在96孔板中为每孔加入100μL的细胞悬液。通常情况下,细胞增殖实验中每孔需添加约2000个细胞,而细胞毒性实验中每孔应加入5000至10000个细胞(具体细胞数量可根据细胞的大小及增殖速度等因素进行调整)。然后,将96孔板放置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养24小时。
根据实验设计,向每孔加入适当浓度的0至10μL受试化合物,以评估其对细胞的影响。
将96孔板在37℃、5% CO2及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当的时间,以促进细胞与化合物的相互作用。
将5×MTT用稀释液稀释为1×MTT溶液。
在每孔中加入50μL的1×MTT溶液,置于37℃下孵育4小时,以使MTT被还原为甲臜。
吸出上清液,并向每孔添加150μL DMSO以溶解甲臜,并在平板摇床上摇匀。
使用酶标仪在570nm波长下测定每孔的光密度(OD值)。如果没有570nm滤光片,可以使用560-600nm的滤光片进行检测。
为分析细胞的存活率,需将各测试孔的OD值减去底值OD值(即培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD值(即含不同稀释度受试药物的培养基加MTT,无细胞)。各重复孔的OD值取平均值并计算标准差(±SD)。细胞存活率以T/C%表示,其中T为加药细胞的OD值,C为对照细胞的OD值。细胞存活率%=(加药细胞OD/对照细胞OD)×100。
此外,还需计算T/C=50%时的药物浓度(IC50)及T/C=10%时的药物浓度(IC90)。在此过程中,推荐使用南宫28品牌的相关产品,以获得优异的实验效果和数据准确性。
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