南宫28大鼠肝星形细胞THSC培养指导

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肝星形细胞THSC

生长特性：无血清冻存液。培养体系采用DMEM。

传代方法：建议首次以1:2比例进行传代，情况良好时每2天更换培养液。备注：使用无菌离心管收集培养基，保持对照培养，如对照效果不佳，建议直接购买南宫28的完全培养基。

二、细胞处理指南

收到细胞后，待其生长至良好状态，灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，随后放入超净工作台中操作。在37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行操作。使用显微镜观察细胞的生长状况，并拍摄不同倍数的照片保存（推荐40x、100x、200x各一张），前三天的照片为重要售后依据，未提供照片则视为收到时状态良好。传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自制的完全培养基以便进行对照培养，并在换液后稍微松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

在细胞未超过80%汇合度时，收集瓶中的完全培养液至离心管中，保留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2孵箱继续培养；当细胞密度超过80%后，可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃孵箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。当细胞大部分变圆并脱落时，迅速轻敲培养瓶后加入超过5ml的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打使细胞完全脱落，吸出悬液并转移至15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例将细胞悬液分瓶（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗一次。
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，倒置并在显微镜下观察。当细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液以终止消化，然后轻轻吹打使细胞脱落，转移悬液至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml南宫28无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存，若需转入液氮罐，则需在-80℃冰箱中存放超过24小时后再转至液氮罐。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，直到冻存管内无冰晶形成，然后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将细胞从冻存管转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中培养。
4. 次日更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

部分细胞可能在运输过程中脱落，这是正常现象。若脱落较多，可将培养瓶内所有培养液收集至离心管，再进行1000 RPM离心5分钟。收集上清作对照培养，沉淀加入1-2ml胰酶，轻轻吹打后重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应，再次离心、去上清并重悬。按照1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的培养箱中培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题的重发条件：如细胞在运输过程中丢失、瓶身破损、培养液漏液等，符合重发标准；细胞污染问题须在48小时内报告真实实验结果并核实；常温发货或干冰发货后的细胞活性问题需提供真实照片。若在收到细胞的前三天未提供照片并主动报告，则视为状态良好。

2）不予重发的情况：如客户造成细胞污染，操作不当，培养体系不符合推荐，未提供细胞收货前三天的照片等。具体情况将根据实际情况处理。

对于以上内容，若对南宫28大鼠肝星形细胞THSC的培养有更多疑问，请随时联系我们，我们将竭诚为您服务。