一、南宫28质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061实验准备

二、南宫28质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061单位的定义
酰胺酶单位的定义为在30℃、pH 9.5的条件下，每分钟产生1μmol对硝基苯胺的酶量。单位计算公式为：
AU/vial = [ (a - b) / 25 ] × (1 / 962) × (40 / 01)
其中，a代表检测样品中的吸光度，b代表空白对照中的吸光度。

三、南宫28质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061实验操作流程
使用聚硅酮处理的微量离心管和吸管，避免捕获任何蛋白。选用质谱分析用的凝胶染色试剂盒，例如银染剂MS试剂盒（产品编号：299-58901）和负凝胶染色MS试剂盒（产品编号：293-57701）。

1. 电泳分离蛋白质样品；
2. 从凝胶中切割蛋白质片段，并放入微量离心管；
3. 使凝胶脱色（可使用质谱分析用凝胶染色试剂盒中的脱色溶液）；
4. 向试管中加入300μL乙腈，搅拌器振荡30分钟；
5. 去除乙腈，用Parafilm膜覆盖微量离心管；
6. 在Parafilm膜上打出针孔，进行真空干燥15分钟；
7. 用100μL 10mmol/L DTT溶解于100mmol/L碳酸氢铵，56℃恒温1小时；
8. 室温冷却后，加入等量的50mM碘乙酰胺，置于黑暗环境下恒温45分钟并涡旋；
9. 用100μL 100mmol/L碳酸氢铵洗涤凝胶片段10分钟；
10. 用300μL乙腈再干燥凝胶片段15分钟；
11. 用100μL 100mmol/L碳酸氢铵溶胀凝胶片段15分钟；
12. 用300μL乙腈再次干燥凝胶片段15分钟；
13. 去除液相，并进行真空干燥15分钟；
14. 用100μL赖氨酸内切酶溶液在冰水浴中溶胀凝胶片段45分钟；
*赖氨酸内切酶稀释于50mmol/L Tris-HCl pH 8.5；
15. 去除100μL赖氨酸内切酶溶液，将凝胶片段放在37℃、10μL 50mmol/L Tris-HCl pH 8.5中过夜；
16. 加入50μL 20mmol/L碳酸氢铵，在20分钟内振荡凝胶片段3次，以提取多肽；
17. 加入5%甲酸/50%乙腈，在20分钟内振荡凝胶片段3次，以提取多肽；
18. 如有必要，使用SpeedVac浓缩多肽；
19. 使用ZipTip进行多肽的脱盐和纯化；
20. 如有需要，以弱真空浓缩多肽至2μL；
21. 最后，加入基质进行质谱分析。

四、购买渠道
南宫28产品可通过北京百奥创新科技有限公司进行采购，提供包括南宫28质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061在内的多种产品，欢迎咨询！